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抗体亲和力测定服务

泰克生物多年来致力于生物分子间的相互作用研究。对核酸、蛋白、病毒等生物分子的互作研究并了解它们的作用机制和功能机理是当前生命科学研究的热点。亲和力是判断分子间相互作用的重要参数,是了解分子以及药物的发现与筛选等的重要指标,我们的科研专家积累了多年的互作研究与检测经验,凭借丰富技术经验,可以为客户提供高质量的亲和力测定服务,我们坚持每一个实验步骤精细控制,保证客户实验的顺利进行。

亲和力是评价可逆反应过程中两个分子间相互作用强弱的特征参数,是了解分子以及识别生物学过程、药物的发现与筛选等的重要指标。在药物早期研究开发、筛选鉴定、以及下游生产质控等多方面有重要意义,而且在生命科学基础研究、生物制药开发等领域也有广泛应用。依托于完善的平台构建,泰克生物着力于为客户提供高品质的一站式技术服务,满足不同客户的实验需求。


█ 服务类型

 

泰克生物基于Octet和Biacore等平台为客户提供准确、快速的亲和力测定服务,根据客户需求提供各具特色的分子间相互作用分析服务,包括但不限于业内常用的检测技术:表面等离振子共振(Surface plasmon resonance, SPR)和生物膜干涉技术(Bio-Layer Interferometry, BLI),保证检测结果准确、客观、可信。我们着力于为客户提供结果准确的检测服务,满足不同客户的实验需求。


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Fig1 Biacore T200

Fig2 ForteBio Octet 96e


BLI亲和力测定:是一种光学分析技术,检测的是生物传感器上固定的生物分子表面层厚度的变化。若待测分子与生物传感器尖端的固定相分子发生结合,其数量的变化可致实时测定的干涉图谱发生相应改变,进而得到分子间相互作用信息。


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Fig3. 受体蛋白与小分子BLI检测结果


SPR亲和力测定:通过将一个分子固定在传感芯片表面的形式,将另一分子以溶液形式连续流过芯片,检测器可以实时检测到溶液中分子与芯片表面分子的结合、解离过程。SPR通过实时记录传感器芯片表面分子质量变化,实时监测分子间相互作用信息。


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Fig4. 受体蛋白与小分子SPR检测结果


█ 亲和力测定值的意义

 

IC50:通常指半抑制浓度(或称半抑制率),即IC50,对指定的生物过程(或该过程中的某个组分比如酶、受体、细胞等)抑制一半时所需的药物或者抑制剂的浓度。在药学中用于表征拮抗剂(antagonist)在体外实验(in vitro)中的拮抗能力。

EC50:通常是指在特定的暴露时间后,能达到50%最大生物效应对应的药物、抗体或者毒素等的浓度。在药学中除了用于表征体外实验中(in vitro)激动剂(agonist)的激活能力外,还可用于表示达到体内(in vivo)最大生物效应一半时所需的血药浓度。

KD:解离常数(dissociation constant),为50%的酶E被抑制剂I结合时对应的游离抑制剂的浓度。某些情况下,可与KI等同。KD一般通过SPR等实验测定,一般不存在底物;而KI测定时,是同时存在底物的,有底物参与竞争。所以一般测定的KI会比KD要大。


█ 样品要求

 

样品类型

要求

抗体,蛋白,多肽,化合物小分子等

* 缓冲液:PBS, HEPPS等不含有机试剂,不含Tris,EDTA或DDT;

* 蛋白样品(含抗体):200ug,浓度>0.5mg/ml;

* 多肽样品:200ug,浓度>1mg/ml;

* 化合物小分子:1mg,浓度>1mg/ml,纯度>90%,溶于100%DMSO或者水中。


█ 服务优势

 

-- 多样化检测平台,满足不同检测需要

-- 高准确度分析仪器,经验丰富的操作以及严格的质量管理,保证结果准确可靠

-- 检测效率高,无需标记,可实现高通量检测,检测过程实时监控

-- 方法设计更加便捷,简单灵活易操作

-- 仪器检测灵敏度更高,样品消耗量更低

-- 抗干扰能力强:检测不受温度、缓冲液折射率等外界环境影响

-- 应用范围广泛:可用于蛋白、核酸、多肽、纳米材料等分子互作分析

-- 提供真正的一站式服务体验:提供从亲和力测定服务,到分子互作研究的一体化解决方案


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抗体亲和力测定服务常见问题解答

  • 测定方法的灵敏度不足,无法准确检测低浓度的抗体或抗原。

    优化实验条件,如增加检测时间、增加信号放大步骤、优化标记物或探针的使用量等;考虑使用更敏感的测定方法,如表面等离子共振(SPR)或生物层析等。

  • 抗体或抗原在测定过程中出现非特异性结合,干扰了测定结果的准确性。

    优化实验条件,如优化洗涤步骤、选择合适的抗原或抗体结构等,减少非特异性结合;进行交叉验证或竞争实验,验证特异性结合;考虑使用阻断剂或质粒载体进行控制。

  • 实验重复性较差,导致测定结果的可靠性和稳定性较差。

    规范化实验操作流程,建立标准化的实验操作流程和操作规程(SOP);加强质量控制,包括标定控制物质、控制实验环境等,减少实验误差;进行实验前的严格校准和验证,确保实验的准确性和稳定性。

  • 测定方法的测定范围较窄,无法覆盖需要的抗体或抗原浓度范围。

    选择适当的测定方法和仪器,确保能够覆盖所需的抗体或抗原浓度范围;考虑采用稀释或富集等技术手段,扩大测定范围;进行多点标定和标准曲线建立,提高测定的准确性和可靠性。

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