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抗体噬菌体展示服务

泰克生物致力于为客户提供高亲和力、高特异性的抗体药物前期发现技术服务,为客户的后续的CAR-T/CAR-NK先导序列设计、抗体人源化、药物靶点抗体开发、抗体偶联药物(ADC)开发、双特异性抗体开发以及高效阻断型中和抗体开发等下游研发工作提供有力支持。泰克生物在药物抗体发现方面拥有10年的项目开发经验和心得,能够为客户提供高质量的针对包括但不限于蛋白、多肽、小分子、病毒、膜蛋白以及mRNA等靶点的驼源VHH发现服务以及不同物种(兔源、鼠源、羊源和驼源等)scFv发现服务。

噬菌体展示技术(Phage Display Technology)是将外源蛋白或多肽的DNA序列插入到噬菌体外壳蛋白结构基因的适当位置,通常为M13噬菌体的P3蛋白,使外源基因随外壳蛋白的表达而展示到噬菌体表面的生物技术。基于噬菌体展示技术(Phage Display Technology),泰克生物能够为客户提供高质量的包括但不限于VHH、scFv等单链抗体噬菌体展示服务,且噬菌体文库库容可达10^8-10^9,文库多样性、插入率、阳性率均可达90%以上,满足各类客户对于抗体噬菌体展示文库的质量要求。噬菌体展示的优势在于其展示纳米抗体文库中变异抗体基因的多样性,各个重组噬菌体(常用噬菌体为M13噬菌体)表面展示出不同的抗原结合域,相较于传统杂交瘤方法,噬菌体展示技术在抗体基因展示与筛选层面则具有非常突出的效率优势(如杂交瘤融合效率一般<0.4%,即1000次融合细胞中,大概4个融合子;而噬菌体展示轻松可以获得10^8-10^9个正确抗体序列)。同时,泰克生物还能提供抗体噬菌体展示配套的下游抗体体外验证(包括但不限于亲和力验证、抗体阻断验证、交叉反应验证等多种下游验证实验)、抗体人源化、抗体亲和力成熟、CAR-T/CAR-NK先导序列设计及细胞杀伤验证等一站式技术服务,客户只需要提供具体的实验需求和靶点信息,泰克生物的科学家均能够根据客户的需求进行合理的方案设计和个性化定制,为客户的科研项目及药物抗体开发助力。

 

█ 噬菌体展示抗体文库构建服务

 

泰克生物可为客户提供驼源VHH纳米抗体库,scFv抗体库等文库构建以及筛选服务。其中VHH纳米抗体库,又称为驼源重链抗体文库,抗体分子量大小为15kDa,是驼源动物产生的特有的一种抗体。目前被广泛应用于CAR-T/CAR-NK治疗性的驼源VHH抗体(又被称为纳米抗体)噬菌体展示发现路径如图1所示:

抗体噬菌体展示服务-泰克生物.jpg

图1基于噬菌体技术平台的驼源VHH抗体发现服务

 

█ 服务内容和周期

 

步骤

服务内容

QC标准

周期

Step1:抗原准备

*抗原类型:

(1) 重组蛋白制备

(2) 小分子(改造)+偶联

(3) 多肽合成+偶联

(4) 客户提供灭活病毒

(5) 客户提供封装好的mRNA

抗原QC标准:

重组蛋白3-3.5mg(纯度>85%);

小分子纯度>90%;

多肽纯度>90%

 

4-6周

Step2:动物免疫

(1) 动物免疫4次,加强免疫一针,共计免疫5针;

(2) 免疫前采集阴性血清,第4针采血进行ELISA检测血清效价;

(3) 若第4针血清抗体效价满足要求,则采血前7天再次加强免疫1针,如不满足要求,则继续常规免疫;

(4) 效价合格,采血分离单核细胞;

动物:背景清晰;

免疫:蛋白/病毒抗原效价>10^5;多肽/小分子抗原效价>10^4; 

10周

Step3:模板cDNA制备

(1) PBMC总RNA提取

(2) 高保真RT-PCR制备cDNA

cDNA:胶图分布均匀;

1 天

Step4:噬菌体展示文库构建

(1) 以cDNA为模板,两轮PCR法扩增VHH基因;

(2) 噬粒构建与转化: VHH基因拼接噬菌粒载体,电击转化TG1宿主菌,构建抗体库;

(3) 鉴定:随机挑选24个克隆,PCR鉴定阳性率+插入率

(4) 辅助噬菌体准备:M13噬菌体扩增+纯化;

(5) VHH展示文库救援

文库阳性率:>90%;

文库插入性率:>90%;

库容:>10^8

2-3周

Step5:文库筛选(3轮筛选)(固相筛选)

(1) 抗原包被(单个蛋白筛选,常规默认是固相筛选法或磁珠分选);

(2) 默认3轮筛选:压力筛选,最大限度去除非特异性抗体;

(3) 挑取单个克隆扩增噬菌体+IPTG诱导表达+ELISA检测阳性克隆;

(4) 挑取全部阳性克隆进行基因测序;

ELISA阳性标准:P/N>3;

VHH筛选标准:CDR氨基酸序列不同

2-3周

Step6:抗体验证

(1) 将获得的抗体序列构建合适的表达载体进行表达+亲和纯化+抗体蛋白定量;

(2) ELISA验证抗体与抗原结合;

(3) BLI法验证抗体亲和力;

(4) 细胞功能验证:流式阻断验证;

重组抗体1mg,纯度90%;

快速亲和力测定结果;

阻断验证结果;

4-6周

 

█ 服务优势

 

-- 物种适应性广泛:人,鼠,兔,羊,羊驼,骆驼,鱼等物种的单抗开发均兼容(不适用牛源单抗开发)

-- 多种驼源免疫可供选择,包括但不限于大羊驼llama、小羊驼Alpaca以及骆驼等,且动物来源背景清晰

-- 拥有免疫基地:动物资源充足,包括但不限于驼源、鼠源、兔源以及羊源等

-- 开发周期短:获得PBMC后,建库到筛选获得抗体序列4-6周

-- 多种抗体库噬菌体展示可选:VHH抗体库展示、scFv抗体库展示等

-- 多种靶点抗体发现服务可选:蛋白、多肽、小分子、病毒、膜蛋白、mRNA等(可针对具体的项目需求设计定制化的多种类型抗原搭配的免疫方案)

-- 技术平台成熟:库容可达10^8-10^9,插入率均满足>90%,筛选获得的抗体亲和力普遍处于nM- pM级别

-- 高标准交付:效价保证、文库质量保证、高亲和力和高特异性抗体保证,为客户的下游实验提供有力支持

-- 实验记录可追溯:QC质控标准(免疫效价、PBMC质控、文库质控及筛选验证质控),中英文实验报告,原始实验记录 

-- 一对一个性化方案定制(包括免疫方案、建库方案、筛选方案以及后续的体外表达验证方案等),满足各类客户的科研项目需求

-- 文库筛选方式多样性:根据客户项目需求设计最佳的筛选方式,如固相筛选、液相筛选、细胞筛选、磁珠筛选等

-- 可提供一系列配套的下游药物抗体开发服务,抗体体外表达验证、抗体人源化、抗体亲和力成熟、双特异性抗体开发、CAR-T先导序列分子设计、抗体偶联药物(ADC)开发等


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抗体噬菌体展示服务常见问题解答

  • 部分抗体可能在噬菌体中表达水平较低,影响抗体产量和活性。

    优化启动子和信号序列、调整培养条件(如温度、培养时间、培养基成分等)、使用高效的宿主菌株和表达载体,以提高抗体的表达水平和活性。

  • 抗体在噬菌体中可能无法正确折叠或组装,导致结构异常或失活。

    选择适当的信号序列和表达宿主、优化培养条件以促进抗体的正确折叠和组装,使用分子筛选技术或蛋白工程方法对抗体进行改造,提高其稳定性和活性。

  • 抗体可能无法正确与噬菌体表面融合或结合,影响其展示效率。

    优化连接序列和融合表达系统,确保抗体能够有效地与噬菌体表面结合;采用蛋白工程技术改造抗体结构,增强其与噬菌体的相互作用。

  • 抗体库中可能存在覆盖度不足的问题,即未能覆盖所有感兴趣的抗原。

    优化抗原的选择、增加文库的容量和多样性、选择多种不同来源的免疫动物等,以提高文库的覆盖度。

立即咨询抗体噬菌体展示服务

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