别再只会用杂交瘤了！一文读懂抗体发现的“三代”技术革命-检测服务专题-泰克生物

别再只会用杂交瘤了！一文读懂抗体发现的“三代”技术革命

您是否也在经历这样的困境：投入数月时间辛苦构建杂交瘤，筛出来的抗体却免疫原性太强，或者对那个关键的保守靶点根本毫无反应？别急着换动物，也许是时候换一种技术思路了。”

做抗体，杂交瘤不再是唯一的选择，甚至可能已经不是最优的选择。抗体发现已经历经了三代，而很多人还停留在第一代。这篇文章将带您看清，从“体内盲选”到“体外精筛”，再到“智能设计”的进化之路。

一．奠基时代：杂交瘤技术

Kohler 和 Milstein 于 1975 年发明了杂交瘤技术，它让大规模生产单一、均一的单克隆抗体成为可能，也因此荣获1984年的诺贝尔奖。

核心原理：用特定抗原多次免疫小鼠，取其脾脏B细胞（能产生抗体）与骨髓瘤细胞（能无限增殖）在体外进行融合，通过有限稀释法最后得到能够产生单一抗体的杂交瘤细胞，进行亲和纯化得到单克隆抗体。这门技术经典，流程相对固定，可以得到完整的IgG抗体，便于后续应用。

但是这门技术有无法回避的局限性：例如，最终得到的是鼠源抗体，直接用于人体会引发强烈的免疫反应，导致疗效下降甚至存在安全隐患；因为小鼠体内存在免疫耐受，所以对于高度保守的靶点，难以产生高效价抗体；筛选通量低、周期长；人源化改造复杂且可能影响其亲和力。

二．第一次革命：展示技术

在20世纪90年代第一个体外展示技术—噬菌体展示技术（phagepro tech?）的出现，将抗体筛选的主战场从体内转移到了体外，开启了全人源抗体的大门。

该技术是将外源基因插入到噬菌体外壳蛋白基因上，随着噬菌体的组装，而将蛋白展示在其表面，随后将噬菌体文库与目标抗原孵育从而筛选出结合的噬菌体，这种方法实现了基因型与表型的关联。相比于杂交瘤技术，该技术可以绕过免疫，直接使用人源抗体库，获得完全人源的序列；可以对任何靶点（包括毒素、不易免疫的靶点）进行筛选；能够通过易错PCR等方法，模拟体细胞高频突变，在体外完成亲和力成熟。

同样，该方法也有一定的局限性：该技术筛选过程在体外进行，获得的抗体可能不如体内自然筛选的抗体稳定、可开发性好；传统的展示技术通常先筛选重链或轻链，再进行组合，可能破坏了体内天然配对的最优组合。

三．第二次革命：单B细胞技术（Super SingleB?）

进入21世纪，伴随着微流控、测序和生物信息学的爆发，抗体发现进入了精准、高速的第三代。

该技术直接从免疫后或感染康复者的外周血中，分离出单个抗原特异性的B细胞，直接获取其抗体的重链和轻链基因。这种技术从源头直接“捕获”，保真性最高、全人源且高效、速度极快可尤其在应对突发传染疾病是优势巨大，可在数天至数周内拿到候选分子。

图1^【2】

四、该如何选择

泰克生物科技（天津）有限公司基于噬菌体展示技术和酵母展示技术，建立了完善的靶向抗体药物发现平台，能够为全球的科学家提供高质量的包括scFv、VHH、Fab等各种类型药物单抗开发服务，并且能够开发各种功能性的结构特征抗体（包括但不限于中和抗体、构象特异性抗体、交叉反应抗体等），同时泰克生物也能够提供配套的下游抗体表达验证、抗体人源化设计与验证、抗体亲和力成熟、CAR-T候选序列设计等相关服务，满足各类客户对于药物抗体开发的需求。

参考文献

[1] Raeisi H,Azimirad M,Asadzadeh Aghdaei H, et al. Rapid-format recombinant antibody-based methods for the diagnosis of Clostridioides difficile infection: Recent advances and perspectives. Front Microbiol. 2022;13:1043214.

[2] Schardt JS,Sivaneri NS,Tessier PM. Monoclonal Antibody Generation Using Single B Cell Screening for Treating Infectious Diseases. BioDrugs. 2024;38 (4):477-486.

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