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纳米抗体开发服务

泰克生物为客户提供基于M13噬菌体展示系统的高亲和力、高特异性的抗体药物前期发现技术服务，为客户后续的CAR-T/CAR-NK先导序列设计、抗体人源化、药物靶点抗体开发、双特异性抗体开发以及高效阻断型中和抗体开发等下游研发工作提供有力支持。泰克生物在药物抗体发现方面拥有超过十年的项目开发经验和心得，能够为客户提供高质量的针对蛋白、多肽、小分子、病毒、膜蛋白等靶点的驼源纳米抗体开发技术服务。

█ 纳米抗体开发技术服务

泰克生物可为客户提供高质量的驼源纳米抗体文库构建以及筛选服务。本技术平台使用M13噬菌体，将来自驼源的VHH纳米抗体基因通过多轮PCR方法插入到M13噬菌体的P3蛋白的N端，使纳米抗体基因随外壳蛋白的表达而展示到噬菌体表面，最后通过类似于“钓鱼”的淘筛方式筛选出跟靶点抗原结合的抗体。泰克生物能够为客户提供高质量的羊驼/骆驼免疫服务，基于噬菌体展示技术的纳米抗体文库构建以及淘筛服务（免疫文库库容为10^9-10^10（天然文库库容为10^10-10^12），文库多样性>90%、插入率95%、阳性率>95%）。相较于传统杂交瘤方法，噬菌体展示技术属于高通量方法：前者融合效率一般<0.4%，即1000次融合细胞中，大概4个融合子杂交瘤细胞；而噬菌体展示轻松可以获得10^8-10^9个正确且不同序列的抗体，并且每一步都可以随意暂停或启动实验，属于模块化实验操作，节省时间以及开发成本。目前被广泛应用于CAR-T/CAR-NK治疗性的驼源VHH抗体（又被称为纳米抗体）噬菌体展示发现路径如图1所示：

VHH纳米抗体发现服务流程-泰克生物.png

图1 基于噬菌体技术平台的VHH纳米抗体发现服务流程

█ 纳米抗体开发服务内容和周期

步骤	服务内容	QC质控标准	周期
Step1：抗原准备	*抗原类型： (1) 重组蛋白制备； (2) 小分子（改造）+偶联； (3) 多肽合成+偶联； (4) 客户提供灭活病毒； (5) 客户提供封装好的mRNA；	（1）重组蛋白(纯度>85%)；（2）小分子纯度>90%；（3）多肽纯度>90%；	4-6周
Step2：动物免疫	(1) 动物免疫4次，加强免疫一针，共计免疫5针； (2) 免疫前采集阴性血清，第4针采血进行ELISA检测血清效价； (3) 若第4针血清抗体效价满足要求，则采血前7天再次加强免疫1针，如不满足要求，则继续常规免疫； (4) 效价合格，采血分离单核细胞；	（1）动物：背景清晰；（2）免疫：蛋白/病毒抗原效价检测；多肽/小分子抗原效价检测；	8-10周
Step3：模板cDNA制备	(1) PBMC总RNA提取； (2) 高保真RT-PCR制备cDNA；	（1）PBMC细胞质控；（2）Total RNA质控；（3）cDNA质控；	1 天
Step4：噬菌体展示文库构建	(1) 以cDNA为模板，PCR法扩增VHH基因； (2) 噬粒构建与转化： VHH基因拼接噬菌粒载体，电击转化TG1宿主菌，构建抗体库； (3) 鉴定：随机挑选克隆，PCR鉴定阳性率+插入率； (4) 辅助噬菌体准备：M13噬菌体扩增+纯化； (5) VHH展示文库救援；	（1）文库阳性率检测；（2）文库插入性率检测；（3）库容检测+序列检测；	2-3周
Step5：文库筛选	(1) 抗原包被（单个蛋白筛选，常规默认是固相筛选法或磁珠分选）； (2) 默认3-5轮筛选：压力筛选，最大限度去除非特异性抗体； (3) 挑取单个克隆扩增噬菌体+诱导表达+ELISA检测阳性克隆； (4) 挑取全部阳性克隆进行基因测序；	（1）ELISA阳性标准设定；（2）VHH筛选标准设定；	2-3周
Step6：成药性评价	(1) 将获得的抗体序列构建合适的表达载体进行表达+亲和纯化+抗体蛋白定量； (2) ELISA验证抗体与抗原结合； (3) BLI法验证抗体亲和力； (4) 细胞功能验证：流式阻断验证；	（1）重组抗体表达质控；（2）EC50 验证；（3）快速亲和力测定结果；（4）阻断验证结果；	4-6周

泰克生物的技术专家为客户进行初步成药性评价后，还可以进一步提供抗体人源化、抗体亲和力成熟、CAR-T/CAR-NK先导序列设计及细胞杀伤验证等一站式技术服务，根据客户的需求进行合理的方案设计和个性化定制，为客户的科研项目及药物抗体开发助力。

█ 纳米抗体开发服务优势


拥有免疫基地大羊驼llama、小羊驼Alpaca、骆驼Camel动物来源清晰	多种文库可选天然文库、VHH抗体库、 scFv抗体文库、Fab抗体文库	多种靶点可选蛋白、多肽、小分子、病毒、膜蛋白、mRNA等	库容保证天然文库库容10^10-10^12 免疫文库库容10^9-10^10

文库筛选方式灵活固相筛选、液相筛选、细胞筛选、磁珠筛选	实验记录可追溯免疫效价监控、PBMC检测质控文库库容质控、筛选验证质控	个性化方案定制免疫方案评估、建库筛库方案体外表达验证方案	药物抗体开发抗体体外表达验证、抗体人源化抗体亲和力成熟、双特异性抗体

纳米抗体开发服务常见问题解答

在肿瘤免疫治疗中，纳米抗体有哪些突破性应用？

答：1 双特异性纳米抗体：例如同时靶向PD?L1和VEGFR2的FAP1V2，在小鼠模型中使原发肿瘤体积缩小 68%，肺肝转移灶减少 82%，肿瘤微环境中效应T细胞浸润提升 4.3倍。2 纳米抗体“装甲化”CART：将抗PD1纳米抗体搭载到CAR?T细胞上，形成自分泌“装甲”。研究显示，该技术使肿瘤局部纳米抗体浓度比传统形式提升 >6500倍，能阻断 63.7% 的PD1信号，显著逆转T细胞耗竭。 3 ADC/双抗开发：纳米抗体可作为ADC的靶向头，或构建双特异性抗体，精准杀伤肿瘤细胞。
纳米抗体在感染性疾病领域有哪些成功案例？

答：纳米抗体在抗病毒、抗菌等领域已取得多项突破：（1）HIV治疗：前述Nb457纳米抗体对HIV假病毒的广谱抑制率达 99.1%，工程化三聚体后甚至实现 100% 抑制，且不易引发病毒耐药逃逸。（2） SARS CoV 2：通过多表位靶向策略设计的纳米抗体平台（AMETA）对SARS CoV 2变体的IC50达亚摩尔水平，亲和力为pM级。
泰克生物在纳米抗体文库构建与筛选方面有哪些技术优势？

答：我们依托成熟的噬菌体展示平台，提供高质量的文库构建与筛选服务：1 库容与多样性：免疫文库库容 10^9至10^10，天然文库库容可达10的12次方，文库多样性>90%，插入率>95%。 2 筛选灵活性：支持固相、液相、细胞筛选及磁珠分选，可根据靶点特性（膜蛋白、病毒、小分子等）定制筛选方案。3 高效筛选：筛选周期仅3至4周。4 质控全程可追溯：从RNA提取、cDNA制备到文库鉴定、筛选验证，每一步均有QC标准（如ELISA阳性标准P/N>3），交付完整实验记录报告
泰克生物的纳米抗体开发服务主要流程是什么？周期多长？

答：我们提供从抗原准备到成药性评价的全程服务，标准流程共6步，总周期约 20到28周。具体可以联系公司的技术支持获得专属定制报价单以及详细方案。
与传统抗体相比，纳米抗体（VHH）有哪些独特优势？

答：1 高穿透性：体积小，能穿透致密组织（如实体瘤）和血脑屏障，到达传统抗体难以触及的靶点。2 高稳定性：在高温、极端pH等条件下仍保持活性，适合口服或局部给药。3 高亲和力：通过噬菌体展示技术筛选的纳米抗体亲和力可达 nM至pM级别（如HIV纳米抗体Nb457的抗病毒活性为pM级）。4 易工程化：可轻松构建为多价、双特异性或与Fc融合的分子，延长半衰期或增强功能。案例说明：南京大学团队从羊驼分离的Nb457纳米抗体，在针对全球117株HIV假病毒的测试中，广谱抑制率达 99.1%，抗病毒活性为 pM级，显著优于传统中和抗体。

在肿瘤免疫治疗中，纳米抗体有哪些突破性应用？

答：1 双特异性纳米抗体：例如同时靶向PD?L1和VEGFR2的FAP1V2，在小鼠模型中使原发肿瘤体积缩小 68%，肺肝转移灶减少 82%，肿瘤微环境中效应T细胞浸润提升 4.3倍。2 纳米抗体“装甲化”CART：将抗PD1纳米抗体搭载到CAR?T细胞上，形成自分泌“装甲”。研究显示，该技术使肿瘤局部纳米抗体浓度比传统形式提升 >6500倍，能阻断 63.7% 的PD1信号，显著逆转T细胞耗竭。 3 ADC/双抗开发：纳米抗体可作为ADC的靶向头，或构建双特异性抗体，精准杀伤肿瘤细胞。
纳米抗体在感染性疾病领域有哪些成功案例？

答：纳米抗体在抗病毒、抗菌等领域已取得多项突破：（1）HIV治疗：前述Nb457纳米抗体对HIV假病毒的广谱抑制率达 99.1%，工程化三聚体后甚至实现 100% 抑制，且不易引发病毒耐药逃逸。（2） SARS CoV 2：通过多表位靶向策略设计的纳米抗体平台（AMETA）对SARS CoV 2变体的IC50达亚摩尔水平，亲和力为pM级。
泰克生物在纳米抗体文库构建与筛选方面有哪些技术优势？

答：我们依托成熟的噬菌体展示平台，提供高质量的文库构建与筛选服务：1 库容与多样性：免疫文库库容 10^9至10^10，天然文库库容可达10的12次方，文库多样性>90%，插入率>95%。 2 筛选灵活性：支持固相、液相、细胞筛选及磁珠分选，可根据靶点特性（膜蛋白、病毒、小分子等）定制筛选方案。3 高效筛选：筛选周期仅3至4周。4 质控全程可追溯：从RNA提取、cDNA制备到文库鉴定、筛选验证，每一步均有QC标准（如ELISA阳性标准P/N>3），交付完整实验记录报告
泰克生物的纳米抗体开发服务主要流程是什么？周期多长？

答：我们提供从抗原准备到成药性评价的全程服务，标准流程共6步，总周期约 20到28周。具体可以联系公司的技术支持获得专属定制报价单以及详细方案。
与传统抗体相比，纳米抗体（VHH）有哪些独特优势？

答：1 高穿透性：体积小，能穿透致密组织（如实体瘤）和血脑屏障，到达传统抗体难以触及的靶点。2 高稳定性：在高温、极端pH等条件下仍保持活性，适合口服或局部给药。3 高亲和力：通过噬菌体展示技术筛选的纳米抗体亲和力可达 nM至pM级别（如HIV纳米抗体Nb457的抗病毒活性为pM级）。4 易工程化：可轻松构建为多价、双特异性或与Fc融合的分子，延长半衰期或增强功能。案例说明：南京大学团队从羊驼分离的Nb457纳米抗体，在针对全球117株HIV假病毒的测试中，广谱抑制率达 99.1%，抗病毒活性为 pM级，显著优于传统中和抗体。

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拥有免疫基地大羊驼llama、小羊驼Alpaca、骆驼Camel动物来源清晰	多种文库可选天然文库、VHH抗体库、 scFv抗体文库、Fab抗体文库	多种靶点可选蛋白、多肽、小分子、病毒、膜蛋白、mRNA等	库容保证天然文库库容10^10-10^12 免疫文库库容10^9-10^10

文库筛选方式灵活固相筛选、液相筛选、细胞筛选、磁珠筛选	实验记录可追溯免疫效价监控、PBMC检测质控文库库容质控、筛选验证质控	个性化方案定制免疫方案评估、建库筛库方案体外表达验证方案	药物抗体开发抗体体外表达验证、抗体人源化抗体亲和力成熟、双特异性抗体

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在肿瘤免疫治疗中，纳米抗体有哪些突破性应用？

纳米抗体在感染性疾病领域有哪些成功案例？

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