TCR-T先导序列开发服务-泰克生物-酵母展示服务专家

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TCR-T先导序列开发服务

泰克生物的专家团队拥有十几年的业务经验，深耕于抗体开发，凭借深厚的经验，已成功搭建起一个高效的抗体药物候选分子平台，该平台不仅涵盖TCR-T先导序列的研发、CAR-T及CAR-NK先导抗体序列的设计服务，还广泛提供如scFv抗体、VHH抗体及Fab抗体的发现服务，所有服务均展现出卓越的品质。依托先进的噬菌体展示技术和单B细胞测序技术，泰克生物在抗体开发领域颇有建树，能够快速为客户提供TCR-T定制开发和CAR抗体先导序列开发服务。

在TCR-T先导序列的开发中，TCR-α链与TCR-β链的正确配对至关重要，泰克生物使用专业的工具对其进行优化，并且能够选择合适的载体来优化其表达条件。基于新一代测序技术，泰克生物能够识别和定位靶点抗原，并通过流式分选出特异性的CD8+T细胞。此外，泰克生物通过单细胞测序技术，能够高通量分离肿瘤特异性TCR编码基因，泰克生物能够将TCR基因片段插入到噬菌体外壳蛋白（如pIII）序列中，使TCR序列能够在噬菌体表面展示，构建的噬菌体文库库容可达10^8-10^9，确保文库多样性、插入率及阳性率超过90%，以满足不同客户对于抗体展示文库的质量要求。

同时，泰克生物提供全面的抗体开发下游服务，包括在TCR-T细胞疗法中的TCR-T细胞的制备与扩增、细胞因子释放测试、体外细胞毒性及增殖试验、细胞活力及生物分布分析等实验，确保TCR-T细胞的安全性和有效性，以及细胞杀伤验证等一站式技术服务。泰克生物的科学家能够针对客户的具体实验需求，分析并设计合理的方案，旨在为客户提供个性化的定制方案，精准满足其需求。

█ TCR-T先导序列开发服务

除了膜蛋白，处于细胞内的蛋白也可以被TCR-T细胞识别到，由此可知，其针对的靶点更广。且TCR-T 在较低的表位密度下，就能够被激活，它的这种特性也使TCR-T细胞疗法的检测与清除能力被提升改善。一般来说，其亲和力比CAR低，意味着在TCR-T细胞疗法中，可能会允许每个 TCR-T 细胞检测并消除几个抗原呈递的肿瘤细胞。泰克生物基于噬菌体展示技术的TCR-T定制开发服务，利用噬菌体展示文库获得相应的序列，进而可以使得细胞拥有相应的清除能力，其具体的流程见图1。

TCR-T定制开发服务流程图-泰克生物.png

图1 基于噬菌体展示技术的TCR-T定制开发服务流程图

█ 服务内容和周期

步骤	服务内容	周期
Step1：动物免疫	(1) 动物免疫4次，加强免疫一针，共计免疫5针； (2) 免疫前采集阴性血清，第4针采血进行ELISA检测血清效价； (3) 若第4针血清抗体效价满足要求，则采血前7天再次加强免疫1针，如不满足要求，则继续常规免疫； (4) 效价合格，采血分离T细胞；	10周
Step2:：cDNA制备	(1) T细胞总RNA提取（RNA提取试剂盒） (2) 高保真RT-PCR制备cDNA（反转录试剂盒）	1个工作日
Step3：抗体库的构建	基于噬菌体展示技术： (1) 以cDNA为模板，两轮PCR法扩增TCR的α链和β链的基因； (2) 噬粒构建与转化：TCR基因片段拼接噬菌粒载体，电击转化TG1宿主菌，构建抗体库； (3) 鉴定：随机挑选24个克隆，PCR鉴定阳性率+插入率； (4) 辅助噬菌体准备：M13噬菌体扩增+纯化； (5) 抗体展示文库救援	3-4周
Step4：抗体文库筛选（3轮）	基于噬菌体展示技术： (1) 默认3轮筛选（固相筛选）：压力筛选，最大限度去除非特异性抗体； (2) 挑取单个克隆扩增噬菌体+IPTG诱导表达+ELISA检测阳性克隆； (3) 挑取全部阳性克隆进行基因测序；	4-5周

█ 服务优势


个性化文库构建服务	技术平台成熟	实验记录可追溯	个性化方案定制	多种筛选体系可选	一站式服务	服务类型多样
提供包括PMECS、pComb3X和pCANTAB 5E在内的等多种噬菌粒载体，并依据客户需求，对其进行改造	库容可达10^8-10^9，插入率稳定超过90%	QC质控标准（免疫效价、多种质控），中英文实验报告，原始实验记录	免疫方案、建库方案、筛选方案以及后续的体外表达验证方案等	固相、液相、细胞筛选等，泰克生物的科学家根据具体的项目进行个性化的设计	免疫原制备、动物免疫、文库构建与筛选、TCR-T细胞制备与扩增、细胞因子释放试、体外细胞毒性试验，以及细胞杀伤实验等的配套服务	根据客户需求提供不同动物源免疫库构建服务和天然抗体库筛选服务

TCR-T先导序列开发服务常见问题解答

什么是TCR-T先导序列？

答：工程化T细胞，即TCR-T疗法，作为一种细胞免疫疗法，隶属于ACT免疫疗法的范畴。该技术能够靶向不在表明表达的抗原。起初，这项技术仅限于将TCR基因序列转导入患者外周T细胞中。科技进步后，现在可经过筛选与鉴定，挑选出能与特定结合位点配对的TCR序列，将其整合至患者自身，使T细胞能识别多种蛋白与HLA组合的TCR。随后，这些经过改造的细胞被重新引入患者外周血中，和肿瘤相关位点结合并有效清除，实现最初目标。泰克生物提供TCR-T先导序列开发服务，具有多年的TCR改造经验。
TCR-T与CAR-T的区别是什么？如何选择这两种方法？

答：现在研究人员正在开发不同的ACT技术，包括TIL疗法、TCR-T细胞疗法和CAR-T细胞疗法。CAR-T技术主要用于可用抗原的稀缺时或者肿瘤异质性或肿瘤免疫抑制时使用。TCR-T技术的生物制品现在已经应用，用来治疗一些患肺癌、骨髓瘤或者黑色素瘤的疾病，TCR-T技术的产品在实践过程中更加可靠有用。相较于CAR-T技术，TCR具有更广泛的反应能力，能和更多种类的抗原反应。当TCR-T细胞与CAR-T细胞针对一个位点进行作用时，TCR-T细胞往往能与实现有效结合与吸附，使所携带的药物更加均匀的分布在各个地方，而CAR-T会使携带的药物吸附在肿瘤细胞外层，向肿瘤细胞内部的渗透效率低。
如果在TCR-T先导序列开发服务，出现TCR错配问题，我们怎么解决？

答：TCR-T先导序列开发服务发生TCR错配，会导致TCR-T技术识别位点出现问题。一个TCR可以和大约106个不同的表位发生反应，进行识别。TCR序列我们通过提取RNA，PCR扩增模板的末端后，对机体细胞进行TCRα和TCRβ测序来确定序列。TCR错配现象发生在利用分子技术向T细胞引入外源性序列时，这一过程可能使机体自身的序列无法匹配。这种不匹配可能促使TCR错误地识别机体的正常细胞，进而引发对自身正常细胞的攻击。减少错配可以增强该技术的作用，可以将能够与肿瘤细胞发生结合的TCR基因通过mRNA或病毒转化到T细胞，使其能够定位到肿瘤细胞。泰克生物通过引入链间二硫键、使用小鼠的TCR序列更换掉人类的TCR恒定结构域、重新操纵编码TCR恒定结构域以及利用基因工程技术敲除内源性TCR等手段，减少基因的错配。
如果在序列开发服务，遇到T细胞无反应性的情况，我们怎样解决？

答：T细胞无反应性代表T细胞正处于低反应性的状态中，这个状态是由于TCR的过度活化和CD28一起产生的共刺激信号产生的。基因编码的T细胞分子还可能激活并损害机体的其他细胞。泰克生物针对恢复T细胞库提出了三大策略：置换、重编程与细胞再生。置换技术利用物理学手段在循环中移除功能受损的细胞，确保剩余细胞维持稳定的免疫效应与记忆T细胞增殖。重编程技术则旨在从功能障碍与衰竭中拯救T细胞。细胞再生方法则通过运用促进细胞生成的物质或因子，逆转胸腺退化过程。
如果在序列开发服务，遇到亲和力不够的情况，我们怎样解决？

答：亲和力对于TCR意义非凡，高亲和力可以提升其疗法的效果。为了提升TCR的亲和力，研究焦点集中在向TCR的互补决定区（CDR）引入氨基酸序列（AAS）变异上。这些TCR的亲和力在低mM甚至nM范围内，这超过了大多数天然存在的TCR的亲和力。使用其他方法也可以产生亲和力在pM范围内的TCR。虽然这些技术在鉴定高亲和力TCR变体方面是有效的，但较高的亲和力与交叉反应性增加相关。因此，结构指导的方法有可能改善ACT，可以大幅度减少脱靶毒性的风险。泰克生物拥有的丰富的项目经验，帮助客户提高亲和力，用专业的技术助力实验。

什么是TCR-T先导序列？

答：工程化T细胞，即TCR-T疗法，作为一种细胞免疫疗法，隶属于ACT免疫疗法的范畴。该技术能够靶向不在表明表达的抗原。起初，这项技术仅限于将TCR基因序列转导入患者外周T细胞中。科技进步后，现在可经过筛选与鉴定，挑选出能与特定结合位点配对的TCR序列，将其整合至患者自身，使T细胞能识别多种蛋白与HLA组合的TCR。随后，这些经过改造的细胞被重新引入患者外周血中，和肿瘤相关位点结合并有效清除，实现最初目标。泰克生物提供TCR-T先导序列开发服务，具有多年的TCR改造经验。
TCR-T与CAR-T的区别是什么？如何选择这两种方法？

答：现在研究人员正在开发不同的ACT技术，包括TIL疗法、TCR-T细胞疗法和CAR-T细胞疗法。CAR-T技术主要用于可用抗原的稀缺时或者肿瘤异质性或肿瘤免疫抑制时使用。TCR-T技术的生物制品现在已经应用，用来治疗一些患肺癌、骨髓瘤或者黑色素瘤的疾病，TCR-T技术的产品在实践过程中更加可靠有用。相较于CAR-T技术，TCR具有更广泛的反应能力，能和更多种类的抗原反应。当TCR-T细胞与CAR-T细胞针对一个位点进行作用时，TCR-T细胞往往能与实现有效结合与吸附，使所携带的药物更加均匀的分布在各个地方，而CAR-T会使携带的药物吸附在肿瘤细胞外层，向肿瘤细胞内部的渗透效率低。
如果在TCR-T先导序列开发服务，出现TCR错配问题，我们怎么解决？

答：TCR-T先导序列开发服务发生TCR错配，会导致TCR-T技术识别位点出现问题。一个TCR可以和大约106个不同的表位发生反应，进行识别。TCR序列我们通过提取RNA，PCR扩增模板的末端后，对机体细胞进行TCRα和TCRβ测序来确定序列。TCR错配现象发生在利用分子技术向T细胞引入外源性序列时，这一过程可能使机体自身的序列无法匹配。这种不匹配可能促使TCR错误地识别机体的正常细胞，进而引发对自身正常细胞的攻击。减少错配可以增强该技术的作用，可以将能够与肿瘤细胞发生结合的TCR基因通过mRNA或病毒转化到T细胞，使其能够定位到肿瘤细胞。泰克生物通过引入链间二硫键、使用小鼠的TCR序列更换掉人类的TCR恒定结构域、重新操纵编码TCR恒定结构域以及利用基因工程技术敲除内源性TCR等手段，减少基因的错配。
如果在序列开发服务，遇到T细胞无反应性的情况，我们怎样解决？

答：T细胞无反应性代表T细胞正处于低反应性的状态中，这个状态是由于TCR的过度活化和CD28一起产生的共刺激信号产生的。基因编码的T细胞分子还可能激活并损害机体的其他细胞。泰克生物针对恢复T细胞库提出了三大策略：置换、重编程与细胞再生。置换技术利用物理学手段在循环中移除功能受损的细胞，确保剩余细胞维持稳定的免疫效应与记忆T细胞增殖。重编程技术则旨在从功能障碍与衰竭中拯救T细胞。细胞再生方法则通过运用促进细胞生成的物质或因子，逆转胸腺退化过程。
如果在序列开发服务，遇到亲和力不够的情况，我们怎样解决？

答：亲和力对于TCR意义非凡，高亲和力可以提升其疗法的效果。为了提升TCR的亲和力，研究焦点集中在向TCR的互补决定区（CDR）引入氨基酸序列（AAS）变异上。这些TCR的亲和力在低mM甚至nM范围内，这超过了大多数天然存在的TCR的亲和力。使用其他方法也可以产生亲和力在pM范围内的TCR。虽然这些技术在鉴定高亲和力TCR变体方面是有效的，但较高的亲和力与交叉反应性增加相关。因此，结构指导的方法有可能改善ACT，可以大幅度减少脱靶毒性的风险。泰克生物拥有的丰富的项目经验，帮助客户提高亲和力，用专业的技术助力实验。

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