细胞核酸适配体筛选服务-泰克生物-酵母展示服务专家

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细胞核酸适配体筛选服务

泰克生物在药物抗体领域深耕多年，抗体开发、适体体外筛选、亲和力成熟等方面都积累了深厚的经验，能够提供多种样品类型的适体体外筛选服务，如蛋白、多肽、氨基酸、小分子物质、细胞和细菌、金属离子等。泰克生物能够提供定制化的适体体外筛选服务，确保高效、精准且快速地筛选出客户所需的适配体序列。此外，泰克生物能够为客户提供涵盖核酸适配体筛选的上下游服务，从基因分析合成、适体体外筛选、适配体合成，到亲和力测定。对后续的适配体功能验证（包括但不限于亲和力验证、竞争ELISA验证、体外靶向细胞功能性验证（例如：核酸适配体的体外识别和抑制功能验证、体外流式阻断功能等）、体内功能验证（例如：适配体的体内靶向抑制功能验证、信号通路阻断功能验证等））提供有力支持，为客户的后续工作，如靶向特定分子药物的开发等下游研发打好基础。

泰克生物提供基于SELEX技术的适配体体外筛选服务，涵盖了广泛的样品类型，并采用了多样化的筛选方法，如磁珠-SELEX、细胞-SELEX（即Cell-SELEX，常用于细胞靶标的筛选）及捕获-SELEX等，以满足不同样本的特定需求。泰克生物庞大的库容量（10^13-10^14），保障了筛选的广度，足以获得针对客户靶点的核酸适配体，经过多轮筛选（一般为6-10轮）之后，确保筛选出的核酸适配体具备高特异性，其结合亲和力可达nM至pM级别，远超传统适配体的标准。根据每个项目的不同需求，泰克生物的科学家团队能够策划出最优的筛选方案，确保满足客户的要求。

█ 细胞核酸适配体筛选服务

核酸适配体作为一种功能核酸，具有诸多优点，基于其高特异性，来精确锁定靶标分子，有效避免非特异性结合的干扰。通过SELEX技术，可以迅速且大量地合成适配体，无需繁琐的生物制备流程。核酸适配体能在多种环境条件下保持其结构与功能的完整性，同时拥有更高的热稳定性和较低的免疫原性。此外，由于其分子量相对较小，细胞特异性适配体筛选出的适配体更易穿透细胞和组织屏障，迅速抵达作用位点。

SELEX技术的核心在于体外化学合成一个单链寡核苷酸库，并通过反复的筛选与扩增步骤，最终获得与靶标物质高度亲和的核酸适配体。而Cell-SELEX则专注于细胞、细菌等靶标物质的筛选，利用离心、沉淀等手段有效分离并去除未结合的适配体，从而开展细胞特异性适配体筛选，把正向筛选和不表达靶蛋白的细胞的负向筛选相互交替，最终获得适配体，其具体流程见图1。

细胞特异性适配体筛选服务-泰克生物.png

图1 基于SELEX技术的细胞特异性适配体筛选服务流程

█ 服务内容和周期

步骤

服务内容

周期

Step1：

核酸适配体筛选

(1) 客户提供细胞；

(1) 适配体文库筛选与富集：PCR扩增富集+转录+跑胶回收，一般为6-10轮；

(2) 筛选产物进行NGS测序；

(2) 交付：适配体序列 5-15 条，实验报告，原始数据（包括NGS测序原始数据、胶图）

10-15周

Step2：

适配体合成和流式验证（可选）

(1) 客户提供细胞

(2) 根据序列进行适配体合成；

(3) 适配体与细胞进行流式验证；

(3) 交付：实验报告，原始数据

4-5周

█ 服务优势


多种筛选靶点可选	庞大的文库库容	成熟的SELEX技术平台	实验记录全程可追溯	一对一个性化方案定制	多样化的筛选方式	严格的多轮压力筛选
蛋白、多肽、氨基酸、小分子、细胞与细菌等	高达10^14，确保筛选出针对客户特定靶点的核酸适配体	筛选得到的核酸适配体流式验证阳性率高	遵循QC质控标准，提供中英文实验报告及原始实验记录	（包括筛选方案以及后续的验证方案等），满足各类客户的科研项目需求	如磁珠-SELEX、细胞-SELEX、捕获-SELEX等	经过6至10轮筛选，确保获得高亲和力、高特异性的核酸适配体

细胞核酸适配体筛选服务常见问题解答

什么是细胞核酸适配体筛选服务，有什么优点？

答：适配子，包括 RNA适配子和DNA 适配子，通过高特异性和亲和力与多种靶标结合。适配子是通过一种新的细胞选择过程（cell-SELEX）选择的，其中整个完整细胞用作靶标，而另一种相关细胞系用作阴性对照。cell-SELEX 能够生成多个适配体用于靶细胞的分子识别，并且在发现所选适配体的细胞表面结合分子方面具有显著优势。参与细胞表面靶标的能力也使该领域进入了靶向递送治疗剂的领域，因为核酸与小分子药物、蛋白质毒素、脂质体或其他纳米颗粒的偶联相对简单。它作用于天然结构中的蛋白质，其中细胞膜上保守的生物特性不受蛋白质纯化程序的影响。此外，不需要事先了解某些其他蛋白。泰克生物出来可以提供细胞核酸适配体筛选服务外，还可以提供蛋白定制和以及噬菌体展示服务。
DNA适配体和RNA适配体血清稳定性的比较？我们如何提高适配体稳定性？

答：血清稳定性一直是基于核酸的分子应用的一个问题。因此，科学家比较了基于 RNA和DNA的适配体的稳定性。结果表明DNA适配体的血清稳定性远优于RNA适配体。RNA适配体成本高且血清稳定性差，体内使用我们选择DNA适配体。未修饰的RNA在血浆中被清除只需要几秒，而 DNA 被清除需要半小时到一小时。RNA适配体在与大鼠和人血清孵育后迅速降解。相比之下，DNA 适配体在人和大鼠血清中分别稳定60 和30分钟。因此，如果需要高的血清稳定性，大部分研究人员选择DNA适配体，虽然RNA适配体往往展现出相较于其对应的DNA适配体更高的结合力，但科学家仍不懈努力，研发了多种化学改良手段，旨在增适配体在血清中的稳定性。
在实验过程中，我们如何保证筛选出的适配体的特异性？如何确保开发适配子能发挥需要的作用？

答：我们通常结合使用细胞分析、siRNA 敲低和工程细胞系来进一步验证靶标的特异性。我们可以通过标准化流程筛选出具有高特异性的适配体。还可以通过阴性或敲除细胞系进行，并得到体外结合实验的支持。根据泰克生物自己的经验，我们建议使用流式细胞术来测试和验证细胞上的适配子功能，与上述基于大量细胞的检测不同，流式细胞术允许单独询问细胞群中的每个细胞，从而查看观察到的染色是针对样品中的所有细胞还是细胞亚群。此外，有许多经过充分验证的荧光标记抗体可用作对照，它可以验证靶标，还可以比较染色能力。
什么是适配体内化？如何帮助细胞核酸适配体进行内化？

答：适配子来源于称为 SELEX的迭代过程。适配子具有高亲和力、优异的特异性和低毒性。此外，它们稳定且易于合成、修改和操作。尽管适配子在体外非常有效，但大多数适配子在没有外部帮助的情况下不能被细胞直接吸收。截至目前，仅有极少数适配子能够成功被细胞摄取。这些事实都表明了内化能力在体内的应用比较困难。为了提升这一能力，我们采用各种手段去优化条件，诸如采用单核苷酸拼接后组装等前沿技术。也可以对其进行改造，如添加氟、氨基等基团，可以改变其理化性质，提高稳定性，促进适配体与细胞膜的相互作用，帮助适配体内化。
整个服务流程中，我们有注意什么因素？如何提高筛选得的亲和力？

答：一致的细胞培养维持对于 Cell-SELEX 的成功至关重要，例如在所有选择周期、传代次数和生长条件下保持一致的汇合度。细胞生长时间延长或培养条件差会影响状态和表达，因此会导致效率降低。此外，为了消除寡核苷酸的非特异性结合，重要的是在与随机寡核苷酸文库孵育之前用 tRNA、鲑鱼精子DNA 或多聚封闭靶细胞。需要注意的是，胰蛋白酶处理会剥离细胞表面标志物，因此需要通过与培养基孵育至少2小时来回收细胞。此外，如果使用贴壁细胞作为适配体发育的细胞悬液，则应轻轻摇动以防止发生粘附。整个过程在4-37℃的范围内进行，增加选择温度和延长时间会增加适配体内化到细胞中的可能性。

什么是细胞核酸适配体筛选服务，有什么优点？

答：适配子，包括 RNA适配子和DNA 适配子，通过高特异性和亲和力与多种靶标结合。适配子是通过一种新的细胞选择过程（cell-SELEX）选择的，其中整个完整细胞用作靶标，而另一种相关细胞系用作阴性对照。cell-SELEX 能够生成多个适配体用于靶细胞的分子识别，并且在发现所选适配体的细胞表面结合分子方面具有显著优势。参与细胞表面靶标的能力也使该领域进入了靶向递送治疗剂的领域，因为核酸与小分子药物、蛋白质毒素、脂质体或其他纳米颗粒的偶联相对简单。它作用于天然结构中的蛋白质，其中细胞膜上保守的生物特性不受蛋白质纯化程序的影响。此外，不需要事先了解某些其他蛋白。泰克生物出来可以提供细胞核酸适配体筛选服务外，还可以提供蛋白定制和以及噬菌体展示服务。
DNA适配体和RNA适配体血清稳定性的比较？我们如何提高适配体稳定性？

答：血清稳定性一直是基于核酸的分子应用的一个问题。因此，科学家比较了基于 RNA和DNA的适配体的稳定性。结果表明DNA适配体的血清稳定性远优于RNA适配体。RNA适配体成本高且血清稳定性差，体内使用我们选择DNA适配体。未修饰的RNA在血浆中被清除只需要几秒，而 DNA 被清除需要半小时到一小时。RNA适配体在与大鼠和人血清孵育后迅速降解。相比之下，DNA 适配体在人和大鼠血清中分别稳定60 和30分钟。因此，如果需要高的血清稳定性，大部分研究人员选择DNA适配体，虽然RNA适配体往往展现出相较于其对应的DNA适配体更高的结合力，但科学家仍不懈努力，研发了多种化学改良手段，旨在增适配体在血清中的稳定性。
在实验过程中，我们如何保证筛选出的适配体的特异性？如何确保开发适配子能发挥需要的作用？

答：我们通常结合使用细胞分析、siRNA 敲低和工程细胞系来进一步验证靶标的特异性。我们可以通过标准化流程筛选出具有高特异性的适配体。还可以通过阴性或敲除细胞系进行，并得到体外结合实验的支持。根据泰克生物自己的经验，我们建议使用流式细胞术来测试和验证细胞上的适配子功能，与上述基于大量细胞的检测不同，流式细胞术允许单独询问细胞群中的每个细胞，从而查看观察到的染色是针对样品中的所有细胞还是细胞亚群。此外，有许多经过充分验证的荧光标记抗体可用作对照，它可以验证靶标，还可以比较染色能力。
什么是适配体内化？如何帮助细胞核酸适配体进行内化？

答：适配子来源于称为 SELEX的迭代过程。适配子具有高亲和力、优异的特异性和低毒性。此外，它们稳定且易于合成、修改和操作。尽管适配子在体外非常有效，但大多数适配子在没有外部帮助的情况下不能被细胞直接吸收。截至目前，仅有极少数适配子能够成功被细胞摄取。这些事实都表明了内化能力在体内的应用比较困难。为了提升这一能力，我们采用各种手段去优化条件，诸如采用单核苷酸拼接后组装等前沿技术。也可以对其进行改造，如添加氟、氨基等基团，可以改变其理化性质，提高稳定性，促进适配体与细胞膜的相互作用，帮助适配体内化。
整个服务流程中，我们有注意什么因素？如何提高筛选得的亲和力？

答：一致的细胞培养维持对于 Cell-SELEX 的成功至关重要，例如在所有选择周期、传代次数和生长条件下保持一致的汇合度。细胞生长时间延长或培养条件差会影响状态和表达，因此会导致效率降低。此外，为了消除寡核苷酸的非特异性结合，重要的是在与随机寡核苷酸文库孵育之前用 tRNA、鲑鱼精子DNA 或多聚封闭靶细胞。需要注意的是，胰蛋白酶处理会剥离细胞表面标志物，因此需要通过与培养基孵育至少2小时来回收细胞。此外，如果使用贴壁细胞作为适配体发育的细胞悬液，则应轻轻摇动以防止发生粘附。整个过程在4-37℃的范围内进行，增加选择温度和延长时间会增加适配体内化到细胞中的可能性。

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