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酵母单杂交服务

酵母单杂交（Yeast One-Hybrid, Y1H）是一种在真核酵母细胞内，用于鉴定蛋白质与特定DNA序列（如启动子、增强子等顺式作用元件）之间相互作用的强大工具。该系统的核心是一个被拆分且功能互补的转录因子GAL4：（1） DNA结合域（BD）：与您感兴趣的目标DNA序列（Bait）融合。（2）转录激活域（AD）：与一个候选蛋白质文库（Prey）融合。当文库中某个蛋白质能够特异性结合到目标DNA序列上时，就会将AD域“招募”至该位置，从而重新组装成有功能的转录因子GAL4，进而启动下游报告基因（如LacZ）的表达。因此，通过检测报告基因的活性（如在含有X-gal的培养基上产生蓝色菌落），即可直接筛选并鉴定出能与目标DNA相互作用的蛋白质。泰克生物利用改进的SMART技术构建高质量cDNA酵母文库，库容高达10^8-10^9，插入率与多样性均>90%，为高成功率筛选奠定基础。

█ 酵母单杂交技术基本原理

当科学家在研究特定基因的调控元件-顺式作用元件：启动子、增强子和沉默子（统称为：顺式作用元件），有哪些未知蛋白能够结合该顺式作用元件，引发该顺式作用元件对应的基因进行转录和表达。以上述需求为基础，酵母单杂交（Yeast one-hybrid, Y1H）体系可完成这种验证。如图1所示，在酵母单杂交体系中，转录因子GAL4类似于一个桥梁的作用，基本原理在于转录因子GAL4能够调控酵母半乳糖苷酶基因表达，当酵母发生半乳糖苷酶表达时，在含有X-gal的平板上半乳糖苷酶催化X-gal产生蓝色的菌落。

转录因子GAL4含有两个能够独立发挥功能作用的结构域：转录激活结构域（AD）和DNA结合结构域（BD）。将含有各种cDNA序列的文库克隆进带有GAL4-AD的表达载体中，形成载体1；将顺式作用元件克隆带有GAL4-BD的载体中，形成载体2。然后将载体1和载体2共同转化进入同一个酵母细胞中，进行共表达：如果载体1中，cDNA-GAL4-AD表达后的融合蛋白能够结合载体2中的顺势作用元件，载体1中的GAL4的AD与载体2中的BD结合在一起形成完整的转录因子GAL4，GAL4与半乳糖苷酶基因上游结合，促使半乳糖苷酶基因表达后产生酶活催化作用（即报告基因）。

酵母单杂交技术服务-泰克生物1.png

图1 酵母单杂交技术原理

泰克生物构建的酵母单杂交cDNA文库的库容可达10^7-10^8，文库多样性、插入率均可达90%以上，满足各类客户对于酵母单杂交文库的质量要求。同时，泰克生物还能提供酵母单杂交文库构建与筛选的配套的下游基因合成和亲和力测定验证等一站式技术服务，客户只需要提供具体的目的基因DNA序列信息（待研究的顺式作用元件/启动子序列）、需要构建的文库种类以及样本信息，泰克生物的科学家均能够根据客户的需求进行合理的方案设计和个性化定制，为客户的科研项目及靶向互作蛋白/新转录因子的发现助力。

█ 酵母单杂交技术适用的实验类型

表1 酵母单杂交常用验证类型
已知DNA与未知蛋白质之间是否存在相互作用	发现结合于顺式作用元件的新基因
定位经证实的DNA结合蛋白的DNA结合结构域	DNA结合对应碱基序列

█ 酵母单杂交服务内容和周期

步骤

服务内容

周期

选择1：酵母单杂交文库构建

(1) 总RNA提取（+mRNA纯化制备）；

(2) 高保真RT-PCR制备cDNA；

(3) 载体构建与转化：载体构建（cDNA连接酵母单杂交载体：融合AD）+电击转化酵母菌株；

(4) 涂板挑取阳性克隆+阳性克隆PCR扩增（跑胶鉴定）+WB表达验证（客户允许添加标签的情况）+文库NGS测序；

(5) 交付：酵母文库质粒1管（>500ug），酵母文库甘油菌10-20ml，实验报告；

4-6周

选择2：酵母单杂交文库筛选

(1) 自激活验证；

(2) 目的基因DNA（顺式作用元件或启动子）-BD融合质粒与文库质粒共转酵母菌株；

(3) 酵母筛选；

(4) 筛选结果测序+回转验证；

(5) 交付：实验报告、测序原始数据；

3-5周

█ 酵母单杂交术平服务优势


高产率文库构建平台	全流程质控与可追溯性	专业的售前与项目支持	一站式交付与深度验证
采用SMART建库技术，有效富集全长cDNA，确保文库覆盖度与多样性（库容10^7-10^8，插入率>90%），大幅提高稀缺转录因子筛选成功率。	从RNA质检、文库库容评估到阳性克隆验证（PCR、测序），每一步均有严格的SOP与QC节点，提供中英文双语实验报告，确保实验过程完全透明、结果真实可信。	专业的实验方案咨询与优化，协助您设计最佳 bait 序列，并提供阳性质粒与阴性对照，确保筛选特异性，有效降低背景噪音与假阳性。	可提供从阳性克隆回转验证、蛋白质亲和力测定（如SPR/BLI）到后续功能研究的延伸服务，助力您的研究从“发现”快速走向“验证”。

酵母单杂交服务常见问题解答

什么是酵母单杂交技术？它的基本原理是什么？

答：酵母单杂交（Yeast One-Hybrid）技术是一种用于筛选和鉴定特定DNA序列与转录因子之间相互作用的方法。该技术基于酵母细胞的转录系统，通过将目标DNA序列与一个转录因子相结合来检测DNA-蛋白质的相互作用。在酵母单杂交中，目标DNA片段（通常是启动子区域或增强子）被克隆到酵母表达载体中，而转录因子的DNA结合域被融合到激活域上。当目标DNA和转录因子之间发生相互作用时，转录因子的激活域会被激活，从而驱动报告基因的表达，进而可以通过报告基因的活性来判断DNA和蛋白质之间的结合情况。
酵母单杂交技术的主要应用有哪些？

答：酵母单杂交技术广泛应用于基因调控研究、转录因子的筛选、以及DNA-蛋白质相互作用的检测。首先，酵母单杂交可用于发现和鉴定新型的转录因子，特别是那些可能与特定的基因调控区域结合的转录因子。其次，它也广泛用于研究基因表达的调控机制，帮助识别哪些转录因子在特定的生理或病理条件下发挥作用。此外，酵母单杂交可以用来探索疾病相关基因的调控网络，特别是在癌症、免疫反应和代谢调节等领域。此外，该技术还可以用于筛选小分子化合物或天然产物，评估其对DNA-蛋白质相互作用的抑制作用，为药物开发提供线索。
酵母单杂交技术与酵母双杂交技术有何区别？

答：酵母单杂交技术与酵母双杂交技术都是用于检测DNA-蛋白质相互作用的工具，但它们的应用和工作原理有所不同。酵母单杂交主要用于检测DNA与转录因子之间的相互作用，通常用于识别特定DNA序列（如启动子、增强子等）和转录因子之间的结合。而酵母双杂交则用于检测两种不同的蛋白质之间的相互作用，它通过将两个蛋白质分别与激活域和DNA结合域融合，从而使蛋白质之间的相互作用能够激活报告基因的表达。简而言之，酵母单杂交关注的是DNA与蛋白质的相互作用，而酵母双杂交关注的是蛋白质与蛋白质的相互作用。
如何优化酵母单杂交实验的实验条件？

答：优化酵母单杂交实验的实验条件对于获得准确和可靠的结果至关重要。首先，合理选择目标DNA序列和转录因子是优化实验的关键。目标DNA片段通常应选择具有高亲和力的转录因子结合位点，而转录因子应该是高效的激活因子。其次，酵母培养条件也非常重要。培养温度、培养基的成分以及酵母菌株的选择都会影响酵母细胞的生长状态和转录活性。为了提高实验的灵敏度，可以调整报告基因的表达系统，如使用高效的报告基因（如β-半乳糖苷酶或荧光素酶），以及选择适当的诱导剂来优化转录因子的激活效果。最后，适当控制背景噪音和非特异性结合是保证实验特异性的关键，可以通过设置阴性对照实验来排除非特异性反应。
酵母单杂交技术在药物筛选中的应用是怎样的？

答：在药物筛选中，酵母单杂交技术可以用于寻找能够干扰DNA与转录因子结合的小分子化合物。这种应用通常通过将靶标DNA序列（如转录因子的结合位点）与报告基因系统结合，构建酵母单杂交筛选平台。然后，通过将化合物加入培养基中，观察是否能抑制报告基因的表达。如果某个小分子能够抑制DNA与转录因子之间的结合，则表明该化合物可能作为潜在的转录因子抑制剂，具有一定的药物开发价值。该方法在筛选针对癌症、病毒感染、代谢性疾病等领域的药物时具有重要应用，能够帮助发现新的靶向药物并加速药物开发的进程。

什么是酵母单杂交技术？它的基本原理是什么？

答：酵母单杂交（Yeast One-Hybrid）技术是一种用于筛选和鉴定特定DNA序列与转录因子之间相互作用的方法。该技术基于酵母细胞的转录系统，通过将目标DNA序列与一个转录因子相结合来检测DNA-蛋白质的相互作用。在酵母单杂交中，目标DNA片段（通常是启动子区域或增强子）被克隆到酵母表达载体中，而转录因子的DNA结合域被融合到激活域上。当目标DNA和转录因子之间发生相互作用时，转录因子的激活域会被激活，从而驱动报告基因的表达，进而可以通过报告基因的活性来判断DNA和蛋白质之间的结合情况。
酵母单杂交技术的主要应用有哪些？

答：酵母单杂交技术广泛应用于基因调控研究、转录因子的筛选、以及DNA-蛋白质相互作用的检测。首先，酵母单杂交可用于发现和鉴定新型的转录因子，特别是那些可能与特定的基因调控区域结合的转录因子。其次，它也广泛用于研究基因表达的调控机制，帮助识别哪些转录因子在特定的生理或病理条件下发挥作用。此外，酵母单杂交可以用来探索疾病相关基因的调控网络，特别是在癌症、免疫反应和代谢调节等领域。此外，该技术还可以用于筛选小分子化合物或天然产物，评估其对DNA-蛋白质相互作用的抑制作用，为药物开发提供线索。
酵母单杂交技术与酵母双杂交技术有何区别？

答：酵母单杂交技术与酵母双杂交技术都是用于检测DNA-蛋白质相互作用的工具，但它们的应用和工作原理有所不同。酵母单杂交主要用于检测DNA与转录因子之间的相互作用，通常用于识别特定DNA序列（如启动子、增强子等）和转录因子之间的结合。而酵母双杂交则用于检测两种不同的蛋白质之间的相互作用，它通过将两个蛋白质分别与激活域和DNA结合域融合，从而使蛋白质之间的相互作用能够激活报告基因的表达。简而言之，酵母单杂交关注的是DNA与蛋白质的相互作用，而酵母双杂交关注的是蛋白质与蛋白质的相互作用。
如何优化酵母单杂交实验的实验条件？

答：优化酵母单杂交实验的实验条件对于获得准确和可靠的结果至关重要。首先，合理选择目标DNA序列和转录因子是优化实验的关键。目标DNA片段通常应选择具有高亲和力的转录因子结合位点，而转录因子应该是高效的激活因子。其次，酵母培养条件也非常重要。培养温度、培养基的成分以及酵母菌株的选择都会影响酵母细胞的生长状态和转录活性。为了提高实验的灵敏度，可以调整报告基因的表达系统，如使用高效的报告基因（如β-半乳糖苷酶或荧光素酶），以及选择适当的诱导剂来优化转录因子的激活效果。最后，适当控制背景噪音和非特异性结合是保证实验特异性的关键，可以通过设置阴性对照实验来排除非特异性反应。
酵母单杂交技术在药物筛选中的应用是怎样的？

答：在药物筛选中，酵母单杂交技术可以用于寻找能够干扰DNA与转录因子结合的小分子化合物。这种应用通常通过将靶标DNA序列（如转录因子的结合位点）与报告基因系统结合，构建酵母单杂交筛选平台。然后，通过将化合物加入培养基中，观察是否能抑制报告基因的表达。如果某个小分子能够抑制DNA与转录因子之间的结合，则表明该化合物可能作为潜在的转录因子抑制剂，具有一定的药物开发价值。该方法在筛选针对癌症、病毒感染、代谢性疾病等领域的药物时具有重要应用，能够帮助发现新的靶向药物并加速药物开发的进程。

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